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    ?;铮ˋBW)基質膠常見問題及解決方案

    A、關于基質膠應用的常見問題


    1.ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質用于哪些實驗?
    ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質可進行體內應用研究,如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高濃度蛋白同時可使得
    ABW?Matrigengel基底膜基質被注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位,便
    于用于原位分析和/或以后的切除。


    2.如何將ABW?Matrigengel基底膜基質用于3D培養?怎樣制作3D膠?需要將細胞嵌入到
    ABW?Matrigengel基底膜基質中嗎?
    ABW?Matrigengel基底膜基質可進行體外應用研究,如制備厚層包被用于3D細胞培養。細胞可以內嵌在
    ABW?Matrigengel基底膜基質中生長或者直接接種在ABW?Matrigengel基底膜基質表面(覆蓋法)生長。


    3.什么情況下,需要使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質?
    對于涉及顏色檢測的實驗,推薦使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質,如使用熒光染料或Drabkins法計數內皮
    細胞成管實驗。對于子宮內膜細胞培養,也需使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質。
    此外,酚紅和非甾體雌激素結構類似,有類雌激素效應。在實驗動物體內具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。


    4.如何從ABW?Matrigengel基底膜基質中收獲細胞?
    推薦使用中性蛋白酶消化或細胞回收方案來收獲培養在ABW?Matrigengel基底膜基質中的細胞。
    (1)中性蛋白酶消化
    中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液,不會損傷細胞或細胞表面蛋白
    。對于需要繼續接種培養或進行檢測的細胞,使用中性蛋白酶不會產生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
    (2)細胞回收
    對于代謝研究和需抽提細胞中RNA時,建議在4℃使用細胞回收解決方案進行非酶消化的細胞收獲。因為
    ABW?Matrigengel基底膜基質中含有痕量的RNA,進行RNA分析時,應設置一個ABW?Matrigengel基底膜基質(不接
    種細胞)的對照組。
    (3)其它
    降低溫度至4℃-6℃使ABW?Matrigengel基底膜基質解聚,以適當轉速離心破壞ABW?Matrigengel基底膜基質結構
    ,獲得單細胞懸液。此方法僅適合少部分應用場景。


    5.哪些情況應該選用薄膠,哪些情況應該選用厚膠,3D細胞培養有哪些應用?
    薄膠主要用于輔助細胞貼壁,有利于細胞增殖;如原代細胞培養,需要一層薄薄的蛋白層輔助,就可以選用薄膠。
    厚膠主要用于3D細胞培養;如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結構(RingAssay),以及進行細胞侵襲實驗等。
    3D細胞培養實驗,可以建立起生理上的細胞-細胞與細胞-細胞外基質相互作用,主要是用于研究細胞與細胞間的相
    互作用以及更復雜的結構作用,如生物組織等。


    6.進行內皮管形成實驗,應該選用多大濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質呢?
    進行該實驗,ABW?Matrigengel基底膜基質最低濃度應不低于10mg/mL。


    7.做細胞侵襲實驗,需要使用多少ABW?Matrigengel基底膜基質進行包被?
    進行細胞侵襲實驗,以包被24孔板為例,推薦使用每孔0.1mL(濃度200-300μg/mL)的ABW?Matrigengel基底膜基質
    (貨號為082704)。


    8.ABW?Matrigengel基底膜基質的最低成膠濃度是多少?
    不同的實驗需要不同濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質,用戶應該根據具體的實驗需求確定。
    ABW
    ?Matrigengel基底膜基質最低成膠濃度為3mg/mL。稀釋時不能簡單進行體積倍比稀釋,不同批次間的
    ABW
    ?Matrigengel基底膜基質濃度有差異,應該根據最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體(如PBS或無血
    清培養基)的量。用于體內研究的ABW
    ?Matrigengel基底膜基質,為了避免成膠不完全,最終工作濃度不應低于
    4mg/mL。


    9.ABW?Matrigengel基底膜基質膠塊在體內可以維持多長時間?
    ABW?Matrigengel基底膜基質膠塊可以在體內維持至少一周的時間。


    10.ABW?Matrigengel基底膜基質可以誘導ES/iPS細胞分化嗎?
    可以的,已經有相關論文報道ABW?Matrigengel基底膜基質可以用于ES/iPS細胞的分化研究。


    B、關于基質膠操作的常見問題


    1.使用ABW?Matrigengel基底膜基質時,需要將移液管、吸頭和離心管預冷嗎?
    是的。因為ABW?Matrigengel基底膜基質在高于10℃的條件下即會開始成膠,我們推薦操作基底膜基質時使用預冷
    的移液管、吸頭和離心管。


    2.ABW?Matrigengel基底膜基質會快速聚合嗎?
    ABW?Matrigengel基底膜基質在22℃至35℃時會快速聚合成膠。


    3.使用ABW?Matrigengel基底膜基質包被過的培養皿可以儲存多長時間呢?
    包被過的培養皿最好當天使用,具體情況取決于實驗目的。需要保存的情況下,可在37°C培養箱中最多存放7天。保
    存時ABW
    ?Matrigengel基底膜基質表面需要使用無血清培養基均勻覆蓋,保持濕潤。


    4.怎樣稀釋ABW?Matrigengel基底膜基質?
    使用冰上預冷的無血清培養基或者pH7.4的PBS對ABW?Matrigengel基底膜基質進行適當比例的稀釋。


    5.應該如何對ABW?Matrigengel基底膜基質進行移液操作?
    推薦使用預冷的移液器或者注射器操作,移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時不要觸及瓶子底部;分液時切忌過快、
    用力過猛。如果使用移液管分液5mL時,應該吸取6mL,分液到移液管內仍有1mL時即停止;如果使用自動移液器,按壓
    到第二檔位吸液,然后按壓到第一檔位進行分液。


    6.ABW?Matrigengel基底膜基質可以反復凍融嗎?
    建議用戶第一次融化后按照單次用量進行分裝,保存。


    7.未稀釋的ABW?Matrigengel基底膜基質中出現的沉淀應該怎么樣處理?
    4℃下低速離心,去除沉淀物。


    8.未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質應該怎樣保存?
    與細胞培養基或緩沖液混合過但未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質,不建議保留再用。


    9.ABW?Matrigengel基底膜基質可以儲存在-70℃嗎?
    可以。 ABW?Matrigengel基底膜基質可以儲存在-70℃。建議客戶將整瓶的ABW?Matrigengel基底膜基質進行分裝,
    儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質的小管中,方便保存和使用。


    10.為什么細胞沒有貼壁,ABW?Matrigengel基底膜基質也脫落了?
    首先,需要檢查細胞的接種濃度是否過高, ABW?Matrigengel基底膜基質的用量應等同于細胞培養體系中培養基的用
    量。其次,如果ABW
    ?Matrigengel基底膜基質被稀釋到過低的濃度,形成的膠體容易從組織培養器皿表面分離。


    11.使用ABW?Matrigengel基底膜基質培養的細胞,如果需要進行切片或者免疫組織化學及免疫熒
    光檢驗,該怎樣固定呢?如何避免解聚?
    可以使用2%濃度的多聚甲醛進行固定。為避免固定后出現解聚的情況,可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定
    劑,常用于電鏡觀察。如果用戶需要進行免疫熒光檢驗,加入戊二醛后,會出現明顯的背景熒光。為了解決這一問題,我
    們建議用戶在固定之后,使用NaBH4使熒光淬滅。NaBH4極易起泡,進行該步驟時,必須在水平操作臺上小心操作,避
    免晃動,盡量減少氣泡的形成。另外,用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進行固定,如0.1%到0.5%,濃度越低,背
    景熒光信號越少。


    C、關于基質膠成分的常見問題


    1.為什么我的ABW?Matrigengel基底膜基質很粘稠?
    基質膠的蛋白濃度越高,膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL,基質膠會顯得非常厚重。
    ABW
    ?Matrigengel基底膜基質在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度ABW?Matrigengel基底膜基質可直接使用
    ,如用于培養腫瘤細胞和/或血管生成因子,注射于小鼠體內后,使細胞保持原位,便于原位分析和/或以后的切除等;
    或者稀釋后,按照標準濃度的ABW
    ?Matrigengel基底膜基質使用方法使用,具體稀釋濃度根據實驗需求確定。
    除因為產品本身濃度高而粘稠外,基質膠的狀態還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關。整個運輸過程中必須
    使用干冰冷藏。如果儲藏ABW
    ?Matrigengel基底膜基質的冰箱帶有自動除霜功能,冰箱除霜過程中升溫,可能使基質膠
    成膠。所以,切忌將ABW
    ?Matrigengel基底膜基質儲藏于此類冰箱中。為保證ABW?Matrigengel底膜基質的使用效果
    ,凍融次數應該盡可能減少。拿到新的ABW
    ?Matrigengel基底膜基質后,請按照單次用量進行分裝。每次融化操作,
    ABW
    ?Matrigengel基底膜基質都應置于冰上。如果ABW?Matrigengel基底膜基質在成膠狀態被凍住,再次融化時將不
    能成恢復液體狀態。


    2.為什么ABW?Matrigengel基底膜基質在37°C成膠,而在4°C時卻呈液體狀態?
    ABW?Matrigengel基底膜基質是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜,新鮮提取的原料中主要包括以下成分:層
    粘連蛋白,IV型膠原,巢蛋白,基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。這些蛋白構成了
    ABW
    ?Matrigengel基底膜基質的基本結構。
    在22℃-37℃溫度條件下,大分子間的共價鍵可以結合,促使ABW
    ?Matrigengel基底膜基質形成凝膠。而在低溫條
    件(如4℃)下,由于沒有足夠的能量促使共價鍵結合,所以ABW
    ?Matrigengel基底膜基質呈現液體狀態。


    3.ABW?Matrigengel基底膜基質中含有DNA和/或RNA嗎?
    是的。ABW?Matrigengel基底膜基質沒有經過DNA酶或RNA酶消化處理,可能會含有痕量的DNA、RNA。


    4.ABW?Matrigengel基底膜基質中有血管內皮生長因子(VEGF)和金屬蛋白酶(MMPs)嗎?
    ABW?Matrigengel基底膜基質中含有微量的血管內皮生長因子(VEGF),也可能含有小鼠腫瘤細胞來源的痕量金屬
    蛋白酶(MMPs)。


    5.ABW?Matrigengel基底膜基質中有LDEV嗎?
    沒有的。ABW?Matrigengel基底膜基質經免疫方法及PCR方法檢測,并不含有乳酸脫氫酶增高病毒(LDEV)或者乳
    酸脫氫酶增生病毒(LDHV)。此外,我們還針對小鼠群體及腫瘤來源篩查了其他種類的病毒,詳細信息請參見產品分
    析證明書COA。


    6.ABW?Matrigengel基底膜基質中有尿素嗎?
    沒有的。在ABW?Matrigengel基底膜基質生產過程中使用了尿素,后續流程中經過透析方法已經去除了。


    7.ABW?Matrigengel基底膜基質使用的什么緩沖液?
    低葡聚糖DMEM(1g/L),其中包含50μg/mL慶大霉素。


    8.ABW?Matrigengel基底膜基質中含有纖維連接蛋白(Fibronectin)嗎?
    是的,通過使用WesternBlot檢驗,我們在ABW?Matrigengel基底膜基質中發現了微量的纖維連接蛋白
    (Fibronectin)。


    9.ABW?Matrigengel基底膜基質中含有玻連蛋白(Vitronectin)嗎?
    ABW?Matrigengel基底膜基質是從小鼠腫瘤組織提取的,某些腫瘤組織中可能含有微量的血液,因此
    ABW?Matrigengel基底膜基質中可能會有痕量的玻連蛋白(vitronectin)。


    10.ABW?Matrigengel基底膜基質中還有什么別的物質?
    ABW?Matrigengel基底膜基質中還可能含有濃度小于0.02%的三氯甲烷,以及腫瘤細胞產生的其他未知蛋白或分子。


    11.ABW?Matrigengel基底膜基質的生產過程會引起層粘連蛋白變性嗎?
    不會引起層粘連蛋白變性。


    12.ABW?Matrigengel基底膜基質的折射率是多少?
    20℃條件下, ABW?Matrigengel基底膜基質的折射率是1.3406到1.3407,相對折射率為1.0056(同等條件下,水的
    折射率為1.333)。


    13.ABW?Matrigengel基底膜基質會有自發熒光嗎?
    ABW?Matrigengel基底膜基質是一種蛋白混合物,經過透析處理后溶解在DMEM培養基中。為防止微生物污染,培
    養基中添加了慶大霉素。所以
    ABW?Matrigengel基底膜基質可能引發熒光的組分包括其中的蛋白質成分,維生素成分以
    及慶大霉素(氨基糖苷類抗生素)。如果需要使用熒光檢測細胞生長狀態,建議使用者建立對照實驗,在所需要的波長條
    件下進行對比,以便排除背景熒光。


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